1　范围

　　本标准规定了“庆元香菇”首发菌株种性研制标准和各级菌种的繁殖培养、生产质量标准、检验方法和保藏、运输条件。

　　本标准适用于研制、生产、经销、使用“庆元香菇”菌种的单位和个人。

2　定义

2.1　香菇菌种

　　专指分类学名为Lentinula edodes (Berk)  Pegler，  在生产性栽培中可长出符合市场需求，有经济效益子实体的纯培养菌丝体。本标准中的香菇菌种均指双核菌丝体。

2.2　仿生菇菌种

　　由龙、庆、景原木砍花栽培的香菇子实体分离筛选或段木栽培的香菇菌种驯后用于“庆元香菇”培养料栽培的菌种。

2.3　生产首发菌株

   它是生产香菇各级菌种的原始出发菌株。 菌株是引进的，必须经有关部门验收,并登记确认；菌株是选育的，必须经有关部门验收、鉴定，并经省农作物品种审定委员会审定或认定，登记确认。常以玻璃试管为容器进行培养和销售。

2.4　一级种

   以首发菌种的菌丝体限额繁殖的菌种，常以玻璃试管为容器进行培养和销售。由省主管部门审批，由具有一级种生产销售许可证的单位限额供种。

2.5　二级种

    以一级种菌丝体繁殖的菌种，常以750ml 透明的玻璃瓶或塑料瓶为容器进行培养和销售。由具有一,二级种生产销售许可证的单位或个人生产销售。

2.6  三级种

　　以二级种的菌丝体繁殖的菌种，常以透明的玻璃瓶或塑料薄膜袋为容器进行培养和销售。由具有一,二,三级种生产销售许可证的单位或个人生产销售。

2.7　双核菌丝

　　亦称异核体菌丝，指每个香菇菌丝细胞内具有2个不同交配型的细胞核,它是可生长子实体的结实性菌丝。

2.8　锁状联合

　　香菇双核菌丝在细胞分裂过程中出现的一种特殊形态，在显微观察时形状恰似是一把锁。它是香菇菌种具有出菇能力的形态指标之一。

2.9　菌丝生长速度

　　指香菇比核菌丝在23℃~25℃条件下的PDA培养基上每24h菌落直径延伸的速度,以℃m/d表示。它是香菇菌种活力的检测指标这一。

2.10　形态指标

　　指香菇菌丝的外形和色泽等指标。

2.11　生理生化指标

　　指香菇菌丝体和子实体生长发育时新陈代谢的各种生理生化检测指标，如温度、含水量、光线、ph值、营养、呼吸量、酶的含量与变化等。

2.12　栽培检验

　　指引进或选育的香菇菌种通过实际栽培而产生的效果检验。这是首发菌株供种前必定要检验的步骤。

2.13　温型

　　以香菇菌种出菇温度范围为指标划分的菌种类型。现分为高温型(15℃~25℃)，中温型(10℃~20℃)，低温型(5℃~15℃)和介于它们之间的若干类型。

2.14　PDA培养基

　　指常用于首发菌株和一级种菌丝培养的葡萄糖琼脂培养基。

2.15　对峙反应

　　遗传性状不同的菌丝生长相遇时的拮抗现象.

2.16　L是香菇学名Lentinula的缩写.

2.17　S是“孢子”英文名称的Spore缩写.

2.18　T是“组织”英文名称的Tissue缩写。

2.19　℃r是“杂交”英文名称的℃ross缩写.

3　菌种质量标准

3.1　种性

　　种性是由品种的遗传基因和环境条件共同决定的。香菇各级菌种的种性是由首发菌株的种性和环境条件决定的。必须使用种性清楚、性状稳定、经有关部门鉴定验收和省农作物品种审定委员会或已登记备案的品种。

3.2　首发菌株的种性

　　指作为生产性栽培用种的始发菌种的种性。主要的种性质量标准有形态区别指标（如朵形大小、菌盖厚薄、色泽深浅、菌柄的粗细长短等），栽培区别指标（如产量、稳定性、抗逆性等），生理生化区别指标（如温型、适应性、生化指标等）。不论是引进还是自选的首发菌株，供种前必须清楚该菌株的种性，并进行三组重复，每组300段以上栽培试验，并取得稳定的效果。一级种由经审批、具备一级种生产许可证单位繁殖供应。

3.3　培养基配方

　　一级种PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，ph值自然。
　　二、三级菌种培养基配方：干杂木屑78%，麦麸20%，糖1%，熟石膏1%，含水量60%，ph值自然。

3.4  菌种繁殖

　　二级种由一级种繁殖扩大而成，三级种由二级种繁殖扩大而成。每支一级种试管扩接4~6瓶二级种，每瓶750ml二级种扩接40~50瓶（袋）三级种。

3.5　菌种培养

3.5.1 温度

　　23℃~25℃

3.5.2 湿度

　　空气相对湿度，60%~70%；培养基湿度，含水率60%左右。

3.5.3 光线

　　暗或弱散射光、无直射阳光。

3.5.4 空气

　　保持通风，空气新鲜。

3.5.5 培养期

　　在23~25℃条件下，一级种培养期为10~20天，二级种培养期35~40天，三级种培养期30～35天。

3.6  菌种纯度

3.6.1 培养基灭菌

　　一级种PDA培养基必须9.8×10Pa，121℃灭菌45min。二级种木屑培养基必须10.4×10Pa，126℃灭菌2h，三级种木屑培养基必须126℃，10.4×10Pa灭菌2H或100℃后灭菌8~10h。

3.6.2　保持种源纯度

　　任何单位和个人不得更改引进、鉴定、登记注册的菌种名和编号。

3.6.3　菌丝纯度

　　菌丝生长正常，色泽一致，无异色异味，无混入杂菌。

3.7　菌丝外现形态指标

　　菌丝白色，棉絮状，在固体培养基上菌丝末端生长整齐，呈放射状，均匀，一级种无黄水和褐色菌斑，有少量爬壁菌丝。成熟的二、三级木屑种色泽一致，木悄呈米黄色，有香菇特有的气味，表面无或有少量褐斑、酱色分泌物，变温刺激和光照后有少量原基出现。

3.8　容器

　　一级种的容器为直径15mm~20mm×150mm~200mm的透明玻璃试管，带有松紧适宜的棉花塞，培养基与棉塞相距2℃m~3℃m；二级种容器为750ml 透明玻璃瓶或相当容量的塑料瓶；三级种为透明的玻璃瓶、塑料瓶或相当容量的聚丙烯菌袋，均为松紧适宜的棉塞或套环、棉花塞。

3.9　保藏期

　　在4℃条件下，一级种保藏期为3~4个月，二、三级种的保藏期为6~8个月；菌丝在隔氧的条件下（如液体石蜡隔氧保藏）保藏期为期1年；在-196℃的液氮中保藏期为3~5年或更长；液体菌种发酵期满即使用。

3.10　包装和运输

　　一、二级种出售时棉塞应有灭菌过的牛皮纸包裹，菌袋间有适当的间隔；每支、瓶、袋菌种均有菌种标签，批量出售的菌种有种说明书；外包装有防雨、防潮、防高温、防摩擦、防重压和易碎品的标记。菌种在菌丝正常生长的温度下非密闭包装运输，高温季节夜间或气调运输。

3.11　菌种标志

　　除符合有关菌种规定外，还应符合{菌种管理条例}有关格式，标签规格如下：

　　级别：A   L—℃r            

　　菌号：℃r—72

　　接种时间：

　　单位：

　　A代表一级种，B代表二级种  ℃r代表杂交种，T代表组织分离种，S代表孢子分离种。

4　菌种质量检验方法

4.1　检验是香菇菌种的方法

4.1.1　标签检验

　　核对菌种名称、菌种编号、确认是香菇菌种和是已审定的菌株。

4.1.2　外现目测菌丝检验

　　按本标准中3。7菌丝外观形态指标检验。

4.2　检验香菇菌种是活体的方法

4.2.1　生长现象检验

　　在无菌的条件下把菌丝移植于PDA或木屑培养基上，置于23℃~25℃温度下培养，有生长现象。

4.2.2  呼吸现象检验

　　将菌丝置于20℃以下的温度培养，在菌丝上方的试管壁或玻璃瓶壁有水雾或水珠出现。

4.3　菌种纯度检验的方法

4.3.1　目测检验

按本标准中3.6菌种纯度和3.7菌丝外现形态指标的标准检验。

4.3.2　培养检验

　　按本标准中4.2.1生长现象检验的方法检验，无发现杂菌。

4.4　活力检验的方法

4.4.1　菌丝恢复生长检验

　　从4 ℃移至23℃~25℃条件下培养，48h内恢复菌丝生长；在PDA培养基上置于23℃~25℃条件下培养，菌落直径24h伸长0。5℃m以上。

4.4.2　显微检验

　　在显微镜下观察，锁状联合频率高。

4.4.3　呼吸量检验

　　用华勃氏呼吸仪或氧电极测试法，测定一定容量内单位重菌丝生长空间氧分压降低程度和℃O2排出量，耗氧量大、排出℃O2量多的菌种活力强，相反活力弱。

4.4.4　酶活性检测

　　酯质同功酶、多酚氧化酶、纤维素酶、虫漆酶等可作为检验菌种活力强弱的指标之一。多酚氧化酶含量高的菌种是菌丝菌龄短、活力强的菌种；纤维素酶和虫漆酶含量高的菌种是活力强、生物转化率高的丰产菌种。

4.5　菌种同拮抗检验

4.5.1　菌丝拮抗检验

　　把不同来源的香菇菌丝接种在同一培养上，有对峙反应的菌种是具有不同遗传基因的菌种，没有对峙反应的是具有相同基因的菌种。

4.5.2  同功酶测定

　　通过菌丝蛋白粹取后对蛋白质中电泳层析酶谱的显色，测出谱带相似程度，以此检验菌种间的异同和遗传特性和相似程度。这是菌种异同程度和是否新菌株的鉴别方法之一。

4.6　菌种种质特性分子标志检测

　　以各菌株细胞中染色体中遗传表达结构中的大小分子或分子基因为标志，检测菌种优良程度，并限得该菌株标志。常用的方法除同功酶谱测定外，还有电泳染色体组型脱氧核糖核酸（DNA）鉴定分析法、限制性片断长度多态性（RFLP）分析法等。