记得20多年前刚上班时，一个干食用菌工作已经多年的老师傅向我们小青年展示扩繁母种技术，在扩繁过程中，我注意到这位老师烧完接种针后，不住的将针往手背上飞快地点一下、点一下，我当时很奇怪，这位老师回答，这是在试一下接种针是否已经冷却，否则直接转扩母种，可能会导致菌种烫死。我当时怀疑，咱们手上都有杂菌，这样做不就又把接种针污染了，老师傅回答说，没有事，手已经用酒精消毒了，不会有杂菌的。现在这个做法对错与否，相信很多朋友一目了然，酒精消毒，只是相对杀灭部分杂菌，但是做到完全无菌是不可能的，所以母种出现大量的杂菌感染也就可以理解了。 

    还有一个搞微生物的好朋友，转扩母种时，总有杂菌污染，无奈之下有求于我，我详细观察了他的接种细节，发现他在烧完接种钩后，为了冷却彻底，习惯性的用酒精棉球擦拭一下，就是这个环节导致接种失败。 

    以上两例失败的原因在于对无菌操作的概念理解不深，没有将无菌操作的理念与生产环节完美结合，所以出现失误就在所难免了。 

    笔者认为，作为一个食用菌职业工作者，必须正确理解无菌操作，在生产中的各个环节，每一个环节都要严格按照无菌操作的要求去做，才能保证最后的高产、稳产。下面简要说明一下我理解的无菌操作理念，以供各位参考。
    1. 培养基灭菌，有常压灭菌及高压灭菌，如何做到让培养基完全无菌，已经是很成熟很普及的技术，这里我看就不必多言了； 
    2.正确了解“无尘即无菌”。日常条件下，消毒灭菌好的培养基不能开放接种，就是因为未加处理的空气中存在大量的灰尘，大量的杂菌孢子及休眠体是附着在灰尘中飞来飞去的，所以将接种区空气中的灰尘完全除掉，也就是完全去除杂菌的过程。工厂化接种车间，层流罩接种净化区，超净台接种区等，都是履行除尘程序，获得洁净空气的典范。 

    这里要求，不是在接种时才考虑除尘，在将培养基从灭菌锅取出等待冷却的过程中，就要讲究无尘，很多大规模生产基地和工厂化菇场的培养基冷却车间就已经基本做到了无尘化处理。你想想，如果你的培养袋在冷却过程中，沾满灰尘，就是空气再干净，那么在接种过程中也很容易导致灰尘进入，大量的杂菌污染也就很有可能了。 

    在实际生产中，如何做到无尘化的方法很多，小规模种植户的接种室可以用喷雾的方法来降尘除尘，检查除尘效果的简易方法，可以用一个手电筒在黑暗条件下照射，有无灰尘会一目了然。当然在简易条件下，单纯做到空气除尘还是不够的，还要结合杀灭杂菌的方法保证接种质量； 

    3.除尘除菌和消毒杀菌相结合。分散的小规模种植户在设备条件上较差，很难做到系统化的除尘除菌技术，那么就需要土洋结合了。生产中广泛使用的接种箱、接种帐、接种室等，空气灭菌用的紫外线灯、臭氧机、离子风机等，气雾消毒剂、烟雾消毒剂等就是根据这个条件而使用的。在这里要了解一点，单纯用杀菌剂灭菌，也不是100%将杂菌杀灭的，更要注意各个环节的无菌操作紧密结合； 

    4.要充分利用“灼烧灭菌”的完全灭菌优势。在所有的洁净技术中，灼烧灭菌是能够做到完全灭菌的，我们在接种过程中，点燃酒精灯，灼烧接种针，那么接种针头部经过灼烧后，就是完全无菌的，酒精灯火焰周围的一小块区域也是完全无菌的，就是有灰尘，也是无菌灰尘。根据这个原理，那么我们在接种时（例如接原种）可以这样做，不必用接种箱，也不必用超净台，任何药剂都不用，只需一个液化气炉子即可，空间空气不要流动，点燃液化气炉，那么液化气炉盘上方的区域就是无菌区域，接种人员带上口罩，在这个区域即可轻松接种。我们的一个学员采用该方法接原种近5000瓶，无一污染，质量是相当高，当然在夏天接种有点热，可以开空调降降温； 

    5.各个生产细节更要充分注意无菌操作。以转扩母种为例，推荐使用超净台，接种针要用酒精灯灼烧，母种试管口及培养基试管口都要灼烧，因为我们在拔下棉塞或硅胶塞时，手上的杂菌肯定会沾到试管口，在转扩时如果针碰到别的物品，应该重新灼烧，不能迁就，当然我们的手还是要用酒精棉球等彻底清洗的。有的地方在接种栽培种时，喜欢用杀菌剂兑好的灭菌水浸泡原种瓶，认为这样能充分灭菌，实际上多此一举，反而有副作用，不如用酒精棉球擦拭一遍消毒更彻底。如此细节，不胜枚举； 
    6.出菇环节的无菌处理。在出菇期，笔者认为无菌操作的执行更是很有必要，比如在预防平菇、金针菇黄斑病的管理细节中，我们提到定期每隔6-7天喷洒治疗细菌性斑点病的杀菌剂，可以做到整个出菇过程基本不发生黄菇病，效果很好；在出菇完毕，将出菇袋彻底清除，出菇棚彻底消毒等等，这些都是无菌操作与食用菌生产完美结合的具体表现。 
    无菌操作的理念不能根据上面我写的一概而论，更多的要在实际生产中随时创新，以上纯属闲谈性质，欢迎广大朋友讨论。 （孙庆温 山东寿光食用菌研究所）
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